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高通量测序文库——样品准备篇

2016-11-30 15:46:02 

高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变,一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing)足见其划时代的改变,同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能,所以又被称为深度测序(deep sequencing)。成功构建测序文库的最基本条件就是要有合格的样品,那么什么样的样品才是合格的呢?

基因组文库和转录组文库分别以DNA和RNA为起始材料,一份合格的样品在欧易生物需要经过一系列的严格质控才能过关!

第一步:NanoDrop进行260/230、260/280的比值检测,确定其比值在1.8~2.2之间,以保证样品的纯度。

第二步:Qubit 定量,采用特异性染料结合的方式特异性的检测样本浓度来实现精确定量。

DNA样品总量:1μg以上;RNA样品总量:4μg以上(具体项目要求有所不同)

第三步:DNA需要进行琼脂糖凝胶电泳检测其片段质量,单一条带且无RNA污染的带型即为合格样品。

RNA由于容易降解,所以我们使用业内质量评估的黄金标准Agilent 2100生物分析仪来检测其完整性(RIN值),RIN值>7的样本我们判定为合格样品。

经过如此多关质检程序后的合格样品用来建库当然就能够保证您的文库质量啦!

如果您觉得这些过程太过繁琐,可以直接提供各种形式原始样本,直接交给欧易生物的专业团队,他们会为您搞定一切!

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