脂质提取方法
1.将细胞用600 μL甲醇-水=1:1(V/V)转移至10 mL 玻璃小瓶中,加20 μL内标(Lyso PC 17:0, 浓度为0.1 mg/mL 甲醇配置),加入600 μL氯仿,超声破碎;
2.细胞超声破碎后的溶液在冰水浴中提取10 min;
3.将所有液体转移到LC-MS 进样小瓶中,4°C静置30 min;
4.液体分层,取下层液体(氯仿层) 600 μL,(若未能明显分层,则需要离心使其分层)转移到另一高回收率GC-MS进样小瓶中;真空挥干;
5.在取完下层溶液的离心管中继续加入600 μL氯仿-甲醇=2:1(V/V),漩涡震荡30 s;冰水浴中超声提取10 min;
6.4°C静置30 min后,取下层液体,继续放入原来的GC-MS小瓶中挥干;
7.挥干后,GC-MS小瓶中的脂质残渣用300 μL异丙醇-甲醇=1:1(V/V)复溶(涡旋30 s,超声3 min),将溶液转移至1.5 mL的离心管中,12000 rpm,4度,离心15 min 后,取200 μL 上清液装入带内衬管的LC-MS进样小瓶中,用于LC-MS分析;