荧光定量 PCR 所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:
TaqMan 荧光探针: PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收; PCR 扩增时, Taq 酶的 5 ' - 3 ' 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条 DNA 链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步。如图 所示。
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