SEARCH
技术服务021-34781616

热门搜索关键词:转录组基因组甲基化酵母文库蛋白芯片

021-34781616

当前位置首页 » 新闻资讯 » 技术&解读&应用 » 酵母文库和测序建库是什么

酵母文库和测序建库是什么

返回列表 来源: 查看手机网址
扫一扫!酵母文库和测序建库是什么扫一扫!
浏览:- 发布日期:2016-10-18 15:40:14【

随着现在生物技术的发展我们经常就会听到各种建库,如酵母文库,以及测序建库。而这些库又都代表了什么呢,接下来的文章将会讲解一下酵母文库以及测序建库。

酵母文库

提到酵母文库不得不提到酵母双杂。酵母转录因子GAL4包含有两个彼此作用但是空间上分离的结构域。一个是DNA结合域(DNA binding domain简称BD),另一个则是转录激活域(Activation domain简称AD)。当两个结构域充分接近的时候则呈现完整的GAL4转录因子活性,并可以激活下游的报告基因。因此可以将想要研究的两个蛋白分别连在含有AD与BD的载体上,之后通过转染酵母,如果这两个蛋白相互作用,则会使AD和BD在空间上相遇,从而激活下游的报告基因,从而表示这两个蛋白是有相互作用的。但是这只能研究两个特定蛋白的相互作用,并且这种方法和大程度上依赖于网站的预测,以及实验人员的猜想。为了研究某种蛋白与哪些蛋白有相互作用,酵母文库就诞生了。

所谓的库,顾名思义就是仓库。也就是包含有所有基因的一个大仓库。我们通过提取想要研究物种(以水稻为例)的总RNA,之后分离出具有编码蛋白功能的mRNA,通过逆转录得到cDNA。之后我们将这些cDNA全部与AD载体连接。这样就得到了一个大的AD文库,之后将其转入酵母中,这样每一个酵母都含有一个构建好的质粒。理论上,这样的一个文库内的酵母能够表达水稻内所有的蛋白(如图1)。

这样我们只要构建我们需要研究蛋白的BD载体,之后与建好的酵母文库杂交进行筛库,来确定相互作用的蛋白。理论上只要能和研究蛋白相互作用的蛋白,在文库中都能筛选得到,这样能够更好地研究蛋白质的功能。

测序建库

测序建库,是伴随着二代测序技术的发展而崛起的一种建库。由于测序并不能读取很长的片段,因此,在测序建库时,会利用特殊的方式(一般是超声或是化学试剂)将DNA随机打成特殊的片段大小。之后利用建库试剂盒进行建库。接下来我们就来简单了解一下建库的基本原理以及简单的流程(这里涉及的主要是常规的建库)

RNA测序建库

由于RNA的不稳定,因此我们建库时一般是需要将其反转录为cDNA。之后通过在其每条链的两端加上A,再通过连接酶连上接头(接头用于接下来的PCR扩增)。之后通过PCR将建好的库扩增得到最后的RNA测序库(如图2)。

DNA测序建库

DNA的建库与RNA的基本类似,只是没有了反转录的过程,且有一个超声波打断的步奏,其余的步骤和RNA的基本类似。

以上只是对我们实验中最常见的库进行了简单的解读。以上的实验步骤都只是为了理解而总结的简易步骤,只是帮助理解,不可应用在正式的实验中,如果需要正式建库可以参照购买的试剂盒给出的说明书,或是联系我们----欧易生物,我们有着非常丰富的酵母文库以及测序建库的经验。

推荐阅读

    【本文标签】:酵母文库 测序建库 文库构建 测序 基因测序 高通量测序 二代测序 分子生物学
    【责任编辑】:欧易生物版权所有:https://www.oebiotech.com转载请注明出处

    欧易生物

    技术热线:021-34781616 咨询热线:4006-4008-26

    上海市闵行区新骏环路138号5幢3层
    service@oebiotech.com
    欧易生物
    欧易生物微信公众号
    沪ICP备-050455 网站地图  Copyright © 2016 上海欧易生物医学科技有限公司 保留所有权利