酵母单双杂载体菌株

产品简介

提供GAL4系统的核体系酵母单杂交、双杂交载体及菌株，泛素系统的膜体系酵母双杂交载体及菌株（电子版载体图谱及序列随产品一并提供）。

质粒扩繁及保存方法

1.提前15分钟将用到的对应抗性的LB平板拿到37℃预热；

2.将收到质粒瞬时离心，以使管壁上的质粒收集于管底；

3.从-80℃冰箱中取出相应的感受态（建议使用商品化的快转感受态DH5α），迅速插入冰中，并做好标记，5分钟后待菌块融化；

4.取1μl质粒加至100 μl感受态中，并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟；

5.将混匀后的菌液（可进行10倍稀释，以防第二天克隆生长太密），加至对应抗性的LB平板上，涂均匀，至表面无水渍；

6.平板倒置放于37℃培养箱过夜培养；

7.挑取单克隆菌落至对应抗性的（2-10 ml)LB液体培养基中，震荡培养12-16h，根据实验需要提取质粒。

8.使用相应引物进行测序验证，测序结果比对正确后，将质粒分装于-20℃冰箱中保存。

酵母菌株扩繁及保存方法               

1.提前准备YPDA固定培养基平板，于30℃预热；

2.将收到的酵母菌株从-80℃冰箱中取出，室温融化；

3.使用灼烧灭菌后的接种环，蘸取一环菌液，于YPDA固体培养基平板上进行“之”字划线；                        

4.平板倒置放于30℃培养箱，培养2-3天；

5.挑取单克隆菌落至2 ml YPDA液体培养基中，震荡培养12-16h，加入甘油（甘油终浓度25%），混匀。

6.将甘油菌分装至无菌离心管中，于-80℃冰箱中保存。

注意：甘油菌不能反复冻融，建议一次使用一支进行划线，用完即丢弃。