酵母转化试剂盒

产品简介

醋酸锂转化法是利用碱性Li+改变细胞膜的通透性，促进感受态的形成使细胞易于吸收外界DNA。

高浓度LiAc改变了酵母细胞膜结构，同时会对酵母细胞产生损害，而高分子聚合物PEG，可以在高浓度醋酸锂环境中保护细胞膜，减少醋酸锂对细胞膜结构的过度损伤，同时使质粒与细胞膜接触更紧密，促进转化。酵母细胞中含有DNA酶，能够降解外源DNA。

Carrier DNA（鲑鱼精DNA），为短的线形单链DNA，在转化实验中主要是保护质粒免于被DNA酶降解，还可在酵母细胞摄取外源性环形质粒DNA中发挥协助作用，能够大大提高其转化效率。在每次使用前务必进行两次热变性，使可能结合的双链DNA打开，保证carrierDNA在转化实验体系中以单链形式存在。

YPD Plus培养基有助于酵母细胞从热击中复苏,提高热激后酵母感受态细胞存活率，提高转化效率。

使用方法

1.取制备好的100 μl酵母感受态细胞，依次加入10 μl预变性的 Carrier DNA ，1 μg待转化质粒，500 μl 1X PEG/TE/LiAc，混匀；

2.30℃水浴，30 min，每10 min混匀一次；

3.42℃水浴热激15 min，每5 min混匀一次；

4.700 g离心5 min，弃掉上清；

5.加入1 ml YPD Plus Liquid Medium重新悬浮，30℃ 220rpm 震荡培养 30-60 min；

6.700 g离心5 min，收集菌体，弃掉上清；

7.加入100 μl 0.9% NaCl，重悬菌体后，涂布相应培养基平板。

8.30℃，培养3-5天，至克隆长出。

保存方法

附件：酵母转化试剂盒（YT001）说明书

酵母单双杂载体菌株

产品简介

提供GAL4系统的核体系酵母单杂交、双杂交载体及菌株，泛素系统的膜体系酵母双杂交载体及菌株（电子版载体图谱及序列随产品一并提供）。

质粒扩繁及保存方法

1.提前15分钟将用到的对应抗性的LB平板拿到37℃预热；

2.将收到质粒瞬时离心，以使管壁上的质粒收集于管底；

3.从-80℃冰箱中取出相应的感受态（建议使用商品化的快转感受态DH5α），迅速插入冰中，并做好标记，5分钟后待菌块融化；

4.取1μl质粒加至100 μl感受态中，并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置5分钟；

5.将混匀后的菌液（可进行10倍稀释，以防第二天克隆生长太密），加至对应抗性的LB平板上，涂均匀，至表面无水渍；

6.平板倒置放于37℃培养箱过夜培养；

7.挑取单克隆菌落至对应抗性的（2-10 ml)LB液体培养基中，震荡培养12-16h，根据实验需要提取质粒。

8.使用相应引物进行测序验证，测序结果比对正确后，将质粒分装于-20℃冰箱中保存。

酵母菌株扩繁及保存方法               

1.提前准备YPDA固定培养基平板，于30℃预热；

2.将收到的酵母菌株从-80℃冰箱中取出，室温融化；

3.使用灼烧灭菌后的接种环，蘸取一环菌液，于YPDA固体培养基平板上进行“之”字划线；                        

4.平板倒置放于30℃培养箱，培养2-3天；

5.挑取单克隆菌落至2 ml YPDA液体培养基中，震荡培养12-16h，加入甘油（甘油终浓度25%），混匀。

6.将甘油菌分装至无菌离心管中，于-80℃冰箱中保存。

注意：甘油菌不能反复冻融，建议一次使用一支进行划线，用完即丢弃。