「酵母双杂交筛选」
酵母双杂交(Yeast Two-Hybrid, Y2H)是一种研究细胞内蛋白质之间相互作用的经典分子生物学技术。最早是1989年由Fields等在研究真核生物基因转录调控中提出并初步建立的。随着分子生物学的发展,在酵母双杂交的基础上又建立了酵母单杂交、膜体系酵母双杂交、酵母三杂交等多项技术,用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA/RNA/配体之间相互作用的研究,在功能基因组学和互作组学研究中发挥重要作用。
图 | 酵母双杂交技术分类
「技术原理」
核体系酵母双杂交:酵母菌中某些基因(报告基因)的表达需要特定的转录激活因子来启动。研究者将两个感兴趣的蛋白质的编码基因分别与转录激活因子的两个不同部分融合。如果这两个蛋白质在酵母细胞内相互作用,它们将把转录激活因子的两部分拉到一起,从而激活报告基因转录表达。
图 | 核体系酵母双杂交技术原理(GAL4系统)
膜体系酵母双杂交:诱饵蛋白与泛素Cub融合于BD载体,文库(猎物)蛋白与泛素NubG融合于AD载体,转入酵母菌株后,只有蛋白相互作用,泛素才能完整结合,进而被UBPs识别剪切,剪切下来的LexA-VP16(人工转录因子)进入细胞核,激活下游报告基因表达。
图 | 膜体系酵母双杂交技术原理(分离泛素膜系统)
图 | 膜体系酵母双杂交技术原理(分离泛素hunter系统)
「技术优势」
高通量筛选:可以同时检测大量的蛋白质相互作用,快速筛选出与目标蛋白质相互作用的潜在蛋白
结果真实可靠:利用酵母细胞的遗传表达系统进行互作检测,无需蛋白表达、纯化等步骤,在一定程度上反映了细胞内的真实情况
灵敏度高:采用高拷贝和强启动子的表达载体,通过报告基因系统,使互作结果放大,可以检测到微弱及瞬时互作蛋白
「欧易生物优势」
经验丰富:对于各种类型诱饵基因有丰富的筛选经验,设计适合的筛选方案
货真价实:对待客户的每个诱饵均细心摸索合适筛选条件;通过一对一涂板+点板验证,假阳性概率低;提供阳性克隆实物交付
筛库规模大:不吝啬铺板数量,保证阳性克隆良好生长环境
多种测序方式选择:根据阳性克隆数量选择一代测序或二代测序
专业的生物分析团队:对于不常见物种可以进行阳性克隆功能注释
实验图片美观:可提供cns文章级别的结果图片