「酵母单杂交筛选」
酵母单杂交(Yeast One-Hybrid, Y1H)是一种研究细胞内DNA-蛋白质之间相互作用的经典分子生物学技术。其研究方向为以靶基因的启动子为诱饵,筛选调控其表达的上游蛋白质,如转录因子等。
「技术原理」
诱饵基因的启动子DNA构建于pAbAi载体,线性化整合到Y1HGold基因组上,形成诱饵酵母菌株,文库(猎物)蛋白与GAL4的激活域融合于AD载体,转入酵母菌株后,如果某个猎物蛋白与诱饵DNA发生相互作用,GAL4 AD将被招募到AbA抗性基因的启动子区域,从而激活AbA抗性基因的表达。这样,含有互作蛋白的酵母细胞就能在含有AbA抗生素的选择性培养基上生长,而没有互作的细胞则不能生长。
图 | 酵母单杂交技术原理(GAL4系统)
「技术优势」
高通量筛选:可以同时检测大量的蛋白质相互作用,快速筛选出与目标DNA相互作用的潜在蛋白
结果真实可靠:利用酵母细胞的遗传表达系统进行互作检测,无需蛋白表达、纯化等步骤,在一定程度上反映了细胞内的真实情况
灵敏度高:采用高拷贝和强启动子的表达载体,通过报告基因系统,使互作结果放大,可以检测到微弱及瞬时互作蛋白
「欧易生物优势」
经验丰富:对于各种类型诱饵基因有丰富的筛选经验,设计适合的筛选方案
货真价实:对待客户的每个诱饵均细心摸索合适筛选条件;通过一对一涂板+点板验证,假阳性概率低;提供阳性克隆实物交付
筛库规模大:不吝啬铺板数量,保证阳性克隆良好生长环境
多种测序方式选择:根据阳性克隆数量选择一代测序或二代测序
专业的生物分析团队:对于不常见物种可以进行阳性克隆功能注释
实验图片美观:可提供cns文章级别的结果图片