核体系酵母文库构建

  


「核体系酵母文库构建
   



酵母文库是一种专门用于筛选与诱饵蛋白或DNA相互作用的蛋白质的cDNA文库。它是通过将特定物种或组织的cDNA全部克隆到酵母表达载体中构建的,用于酵母双杂交筛选或酵母单杂交筛选。

 

核体系酵母文库是基于最常用的GAL4酵母杂交系统构建的,文库载体是pGADT7,之所以命名为核体系,是因为文库载体pGADT7上含有核定位信号SV40 NLS和激活域GAL4 Activation Domain,文库质粒转入到酵母细胞中后,表达出的是GAL4 AD-Prey cDNA 融合蛋白,理论上融合蛋白会定位到细胞核中。





「技术方法与流程
 



核体系酵母文库构建有两种方法:Gateway法SMART法,其中Gateway方法在文库构建过程中无需进行文库载体的酶切连接,而是利用BP和LR重组技术将cDNA重组到文库载体上的,建库流程更为稳定,通过LR重组可以实现一份材料同时构建核膜等多种文库,应用更为广泛。


服务介绍

图 | 核体系酵母文库构建项目流程(Gateway法)


服务介绍

图 | 核体系酵母文库构建项目流程(SMART法)


文库参数

Gateway法建库

SMART法建库

文库容量(E.coli)

≥1×10^7 cfu

≥5×10^6 cfu

插入片断平均长度

≥1000bp

≥1000bp

重组率

≥95%

≥90%


表 | 文库合格指标(欧易生物)




  

「欧易生物优势
 



项目经验丰富:十余年文库技术沉淀,具有丰富的样品处理经验和建库经验,累计构建500+种高质量的不同物种酵母文库,已支持酵母杂交项目文章发表200+


文库质量可靠:建库过程中12道质检环节,严格把关,确保文库质量,支持客户对文库进行质检验收

 

建库类型丰富:1份样品,可同时构建获得核体系、膜体系、表达文库等多种文库


建库方法可选:Gateway法采用特异性重组技术构建文库,在目的文库用完后,可以简单的通过初级文库直接重组,

获得同质量的核/膜/表达等目的文库,而不必重新从样品准备开始;SMART法一步重组获得目的文库


贴心售后:赠送配套的筛库载体菌株、筛库完整方法和售后指导





「应用方向
 



  • 酵母双杂交筛选

  • 酵母单杂交筛选



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