「核体系酵母文库构建」
酵母文库是一种专门用于筛选与诱饵蛋白或DNA相互作用的蛋白质的cDNA文库。它是通过将特定物种或组织的cDNA全部克隆到酵母表达载体中构建的,用于酵母双杂交筛选或酵母单杂交筛选。
核体系酵母文库是基于最常用的GAL4酵母杂交系统构建的,文库载体是pGADT7,之所以命名为核体系,是因为文库载体pGADT7上含有核定位信号SV40 NLS和激活域GAL4 Activation Domain,文库质粒转入到酵母细胞中后,表达出的是GAL4 AD-Prey cDNA 融合蛋白,理论上融合蛋白会定位到细胞核中。
「技术方法与流程」
核体系酵母文库构建有两种方法:Gateway法和SMART法,其中Gateway方法在文库构建过程中无需进行文库载体的酶切连接,而是利用BP和LR重组技术将cDNA重组到文库载体上的,建库流程更为稳定,通过LR重组可以实现一份材料同时构建核膜等多种文库,应用更为广泛。
图 | 核体系酵母文库构建项目流程(Gateway法)
图 | 核体系酵母文库构建项目流程(SMART法)
文库参数 | Gateway法建库 | SMART法建库 |
文库容量(E.coli) | ≥1×10^7 cfu | ≥5×10^6 cfu |
插入片断平均长度 | ≥1000bp | ≥1000bp |
重组率 | ≥95% | ≥90% |
表 | 文库合格指标(欧易生物)
「欧易生物优势」
项目经验丰富:十余年文库技术沉淀,具有丰富的样品处理经验和建库经验,累计构建500+种高质量的不同物种酵母文库,已支持酵母杂交项目文章发表200+篇
文库质量可靠:建库过程中12道质检环节,严格把关,确保文库质量,支持客户对文库进行质检验收
建库类型丰富:1份样品,可同时构建获得核体系、膜体系、表达文库等多种文库
建库方法可选:Gateway法采用特异性重组技术构建文库,在目的文库用完后,可以简单的通过初级文库直接重组,
获得同质量的核/膜/表达等目的文库,而不必重新从样品准备开始;SMART法一步重组获得目的文库
贴心售后:赠送配套的筛库载体菌株、筛库完整方法和售后指导