核体系酵母文库构建

 
 

核体系酵母文库
 

酵母双杂交(Yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用

 

已被广泛应用于蛋白质组学细胞信号转导和功能基因组学等领域

成为分子生物学研究领域的重要实验手段

 

经过不断的完善和发展不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用

更重要的是还可发现与已知蛋白相互作用的未知蛋白


欧易生物结合多年的文库构建经验推出两套酵母双杂交文库构建体系

 

SMART 体系

在现有酵母双杂交文库构建流程(BD MatchmakerTM library)基础之上加入独特步骤

使文库中高丰度表达基因明显降低从而使文库丰度均一提高筛选阳性率

 

Gateway 体系

采用 Gateway 位点特异性重组技术(Cloneminer cDNA library construction kit)构建文库

 


 

 

 

产品应用

 

检测细胞核内发生互作的蛋白质

基于转录因子的转录激活域 AD 与 DNA

结合域 BD 分别构建融合基因

通过激活报告基因表达,探测蛋白互作

 

SMART 体系


均一化可有效降低高丰度基因的含量
从而提高筛选阳性率 

同源重组一步完成文库可用于双杂、单杂、三杂

如转化酵母,可提供100管酵母甘油菌工作液及 1-3 管母液

 

Gateway 体系


mRNA 反转录成 cDNA 构建文库,
不经过 PCR 可避免冗余现象,保证文库质量

采用 Gateway 技术进行建库,欧易提供的初级文库可当做普通 cDNA 文库使用三框型接头可保证蛋白正确表达 

欧易提供的次级文库质粒,既可用于共转筛库又可用于 mating 筛库

如次级文库用完,可用初级文库与 AD 载体重组以获得次级文库,文库可用于双杂、单杂、三杂

如转化酵母,可提供 100 管酵母甘油菌工作液及 1-3 管母液

 

 


 
 
提供内容
 

实验报告:详细实验流程、各阶段电泳图、工作液细胞密度、文库库容量、插入片段长度鉴定图等
Gateway体系可提供初级、次级文库质粒及菌液

 
 
两种体系比较
 

 

 


近三年部分项目文章列表(核体系)


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近三年部分项目文章列表(单杂)


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