「CUT&Tag测序」

CUT&Tag(Cleavage Under Targets and Tagmentation)，即靶向剪切及转座酶技术，是一种利用酶锚定技术进行高效、高分辨率的DNA测序文库构建方法，同时是一种新的DNA-蛋白质互作研究方法，可用于检测组蛋白、RNApolymeraseII和转录因子等具有DNA结合功能的蛋白种类，揭示更多染色质在调控基因表达方面的重要作用，有助于分析细胞量少的样本的特定染色质特征，进一步了解基因调控。

「技术优势」

• 与ChIP-Seq相比无需甲醛交联和免疫共沉淀步骤，省时高效

• 所需的细胞量少

• 背景信号低，可重复性好等

「欧易生物优势」

• 坚持使用原装试剂盒，坚持数据真实

• 实验经验丰富，单细胞解离的上万例组织解离+裂核经验，可应用于CUT&Tag实验中。

• 售后服务坚持一对一人工服务对接，微信群实时沟通，坚持以解决问题为导向，已助力客户发表高水平文章4000+篇，其中CNS文章6篇

• 组学技术全面，灵活多组学服务分析，将文章档次提升新台阶

「技术应用」

• 组蛋白修饰研究

• 转录因子研究

「分析内容」

「结果展示」

「案例分享」

CircXRN2 suppresses tumor progression driven by histone lactylation through activating the Hippo pathway in human bladder cancer

CircXRN2通过激活Hippo通路抑制组蛋白乳糖化诱导的人膀胱癌肿瘤进展

发表期刊：Molecular Cancer | IF：37.3

研究内容

膀胱癌是世界范围内第四大常见恶性肿瘤，预后差。有研究表明，CircRNA通过作为miRNA海绵参与膀胱癌的进展。然而，更深入地研究CircRNA在膀胱癌发生发展中的调控作用具有重要意义。本研究将T24细胞使用chip级H3K18la抗体和IgG进行了CUT&Tag测序，对circXRN2过表达或不过表达的T24和TCCSUP细胞进行转录组测序，并与PubMed数据库相结合，探讨了环状RNA的在膀胱癌方面潜在作用和分子机制。

研究结果证实，circXRN2通过调节H3K18乳酸化来抑制膀胱癌的进展。揭示了CircXRN2与LAST1蛋白结合，保护LAST1蛋白免受SPOP介导的泛素化和降解，从而激活Hippo信号通路，抑制H3K18乳酸化一种新的circRNA分子机制。

图 | LCN2是H3K18乳酸化的靶标，是一种致癌基因

原文解读

https://mp.weixin.qq.com/s/k0UFTPYP4Y6FxgTu6bYAUw

「案例分享」

The histone demethylase Kdm6b regulates the maturation and cytotoxicity of TCRαβ+CD8αα+ intestinal intraepithelial lymphocytes

组蛋白去甲基化酶Kdm6b调控TCRαβ+CD8αα+肠上皮内淋巴细胞的成熟和细胞毒性

发表期刊：CellDeath&Differentiation | IF：15.828

研究内容

组蛋白3在赖氨酸27位点的三甲基化（H3K27Me3）是一种组蛋白修饰，与基因抑制相关。Kdm6b是一种表观遗传酶，负责H3K27Me3的去甲基化，从而促进基因表达。

作者通过单细胞测序发现Kdm6b是一个重要的小肠IELs的细胞内调节因子。Kdm6b基因敲除小鼠TCRαβ+CD8αα+肠上皮内淋巴细胞IELs）数量显著减少。通过RNA-seq、CUT&Tag等技术，发现在Kdm6b缺失的情况下，TCRαβ+CD8αα+IELs的凋亡增加，成熟受阻和裂解靶细胞的能力受损。IL-15和kdm6b通过H3K27Me3的去甲基化介导上调Gzmb和Fasl的表达来促进TCRαβ+CD8αα+IELs的成熟。

此外，Kdm6b还通过控制CCR9启动子的H3K27Me3水平来调控其表达。综上所述，Kdm6b在小肠TCRαβ+CD8αα+IELs的成熟和细胞毒性功能中发挥着关键作用。

图 | T细胞中Kdm6b的缺乏改变了小肠IELs的异质性和TCR库

图 | Kdm6b缺失下调了TCRαβ+CD8αα+IEL效应基因的表达

扩展阅读

https://mp.weixin.qq.com/s/X6z3LcmbfEmndZlo0fM5ag

「送样指南」

• 组织样本：500mg（新鲜组织4℃运输、或冰冻样本-80℃保存运输）以解离后可达到10⁵个数为准

• 细胞样本：10⁵个，90%以上活性；可提供梯度冻存样本（需提供冻存前细胞个数及活性）

• 植物样本：1g（新鲜组织4℃运输、或冰冻样本-80℃保存运输、整株苗样本常温寄送），以抽核后细胞核数量可达到10⁵个数为准

• 物种：有参考基因组且有基因组注释文件的物种

抗体

• CUT&Tag实验的抗体（一抗）需要客户提供

• 抗体用于CUT&Tag实验前需进行Westernblotting杂交验证，条带单一且大小符合预期，客户需提供结果图片

• 抗体不得稀释，不得反复冻融，建议送原管抗体

「常见机会」

1、与 ChIP-seq 相比，CUT&Tag 具有什么优势？

起始细胞量少、操作更简便（无需甲醛交联和超声打断）、数据背景噪音低、实验重复性好

2、 CUT&Tag 测序是否需要设置生物学重复？

建议设置 2 个及以上的生物学重复。根据已有文献显示，CUT&Tag 生物学重复样本相关性较高，重复较好

3、 CUT&Tag 是否可以适用于转录因子的研究？

CUT&Tag 技术用于检测组蛋白、RNA polymerase II 和转录因子等具有 DNA 结合功能的蛋白种类

4、CUT&Tag 和 ATAC-Seq 有什么区别？

ATAC-seq 是针对的染色质开放区域的研究；而 CUT&Tag 是基于靶向的定位切割，用于蛋白质 DNA 互作研究。两个技术研究的对象不一样