为阐明AabHLH93在青蒿素生物合成中的作用，研究者构建了过表达或RNAi干扰抑制AabHLH93的转基因青蒿株系。功能实验证实：过表达AabHLH93能显著提升青蒿素含量（图2a, b）并上调合成相关基因表达（图2c），而RNAi干扰则导致青蒿素含量与合成相关基因表达同步下降（图2d-f）。双荧光素酶报告实验证明AabHLH93能激活合成基因的启动子（图2g）。分子机制上，酵母单杂交与凝胶迁移实验显示，AabHLH93可直接特异性结合核心酶基因AdCYP71AV1启动子区的E-box3元件（图2h, i）。这些结果共同表明，AabHLH93通过直接靶向并激活青蒿素合成基因的转录，正向调控其生物合成。

为进一步探究AabHLH93与AaWRKY9对青蒿素生物合成的协同调控作用，本研究采用双荧光素酶报告基因检测法进行了验证。结果显示AabHLH93与AaWRKY9均能独立提高青蒿素合成，且共表达时对青蒿素合成基因启动子的激活作用显著强于单独表达，说明二者形成了功能协同的转录激活模块（图2j）。此外，AaWRKY9还能激活AabHLH93自身的启动子，而AaJAZ9可抑制该激活，表明在JA与光信号下，二者通过互作与相互调控形成级联放大回路，共同强力促进青蒿素生物合成。

为进一步探究青蒿素生物合成的调控机制，研究者又以AabHLH93为诱饵蛋白通过酵母双杂交筛选青蒿酵母cDNA文库，以鉴定其潜在的相互作用蛋白。通过本次筛选，成功鉴定出AaMYB7是AabHLH93的直接互作蛋白。并通过Y2H、荧光素酶互补、CoIP等进行了互作验证，这些结果共同证明AaMYB7与AabHLH93形成了蛋白复合体（图3a-d）。

接着研究者对AaMYB7进行了表达谱、系统进化及基因功能验证。结果发现，AaMYB7是青蒿素生物合成的一个关键负调控因子。其表达具有发育特异性：虽然在腺毛中高表达（图4a），但随叶片成熟显著上升（图4b），与青蒿素合成基因的表达模式相反，且受茉莉酸（MeJA）处理抑制（图4c）。功能上，过表达 AaMYB7 导致青蒿素含量下降33%–63%（图4d, e），同时关键合成基因表达下调（图4f）；反之，RNAi干扰 AaMYB7 则使青蒿素含量提高1.6–1.8倍（图4g, h），合成基因表达上调（图4i）。分子机制上，双荧光素酶报告实验证实，AaMYB7能直接抑制AdCYP71AV1和AaDBR2等关键合成基因的启动子活性（图4j）。综上，AaMYB7是一个受发育与JA信号调控的转录抑制子，在叶片成熟阶段负反馈抑制青蒿素合成通路。

为探究AaMYB7在青蒿素生物合成中的调控作用机制，研究者进行了多组dual-LUC和互作结构域分析实验。双荧光素酶报告实验表明，AaMYB7能显著抑制AabHLH93对青蒿素合成基因的转录激活作用（图5a）。酵母双杂交分析发现，AaJAZ9与AaWRKY9的C端结构域结合（图5b），而AaMYB7与AabHLH93的C端结构域结合（图5c），两者结合位点与激活因子AaWRKY9-AabHLH93的互作界面存在重叠。AlphaFold3结构预测进一步证实了这种竞争关系（图5d-f）。功能实验显示，AaMYB7能有效削弱AaWRKY9与AabHLH93协同激活合成基因的能力（图5g-j）。综上，AaJAZ9和AaMYB7通过占据并阻断激活复合物（AaWRKY9-AabHLH93）的关键互作界面，实现对青蒿素转录激活程序的负向调控。